血液中乙醇的测定顶空气相色谱法(20160922)
3、道路交通事故涉案者交通行为方式鉴定SFZ JD0101001-2010（20100407）
中华人民共和国司法部司法鉴定管理局发布2016年9月22日公告公布，自2016年9月22日起施行。
目 次
前 言
1范 围
2规范性引用文件
3原 理
4试剂和材料
5仪 器
6测定步骤
7结果计算
附 录A （资料性附录） 乙醇对照品和内标气相色谱图
附 录B （资料性附录） 校准曲线
·前 言
本技术规范按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本技术规范的附录A和附录B为资料性附录。
本技术规范由司法部司法鉴定科学技术研究所提出。
本技术规范由司法部司法鉴定管理局归口。
本技术规范起草单位：司法部司法鉴定科学技术研究所。
本技术规范主要起草人：卓先义、刘伟、向平、沈保华、卜俊、马栋、严慧。
本技术规范所代替规范的历次版本发布情况为：SF/Z JD0107001——2010。
1范 围
本技术规范规定了血液中乙醇的顶空气相色谱测定方法。
本技术规范适用于血液中乙醇的定性及定量分析。
本技术规范的方法检出限为0.01mg/mL；定量下限为0.05mg/mL。
2规范性引用文件
下列文件对于本技术规范的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本技术规范。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本技术规范。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法（GB/T 6682-2008，ISO 3696：1987，MOD）
GA/T 122 毒物分析名词术语
3原 理
本法利用乙醇的易挥发性，以叔丁醇为内标，用顶空气相色谱火焰离子化检测器进行检测，经与平行操作的乙醇对照品比较，以保留时间进行定性分析；以峰面积为依据，用内标法定量。
4试剂和材料
除另有说明外，水为GB/T 6682规定的二级水。
4.1乙醇
色谱纯。
4.2乙醇标准溶液
精密称取适量乙醇，用水配成10.0mg/mL乙醇标准储备溶液。储备液在冰箱中冷藏密闭保存，有效期为6个月。试验中所用其它浓度的标准溶液均从上述储备液稀释而得，在冰箱中冷藏密闭保存，有效期为3个月。
4.3叔丁醇
色谱纯。
4.4叔丁醇溶液
精密称取适量叔丁醇，用水配成5.0mg/mL叔丁醇储备液。储备液在冰箱中冷藏密闭保存，有效期为12个月。将储备液用水稀释，得40.0μg/mL叔丁醇内标工作液，在冰箱中冷藏密闭保存，有效期为6个月。
5仪器
5.1气相色谱仪
配火焰离子化检测器（FID）。
5.2顶空进样器
配1mL定量进样环。
5.3样品瓶
10mL，顶空自动进样器用。
5.4硅橡胶垫
5.5铝帽
5.6密封钳
5.7精密移液器
5.8自动稀释仪
6测定步骤
6.1样品处理
用精密移液器或自动稀释仪取待测血液0.10 mL及0.50 mL 40.0μg/mL 叔丁醇内标工作液，加入样品瓶内，盖上硅橡胶垫，用密封钳加封铝帽，混匀。
6.2测定
6.2.1顶空气相色谱测定参考条件
a)色谱柱（1）：DB-ALC1（30m´0.32mm´1.8mm）石英毛细管柱或相当者；
柱温：恒温40C；
色谱柱（2）：DB-ALC2（30m´0.32mm´1.2mm）石英毛细管柱或相当者；
柱温：恒温40C；
b）载气：氮气，纯度≥99.999%，流速8mL/min；
c）进样口温度：150°C；
d）检测器温度：250°C；
e）加热箱温度：65°C；
f）定量环温度：105°C；
g）传输线温度：110°C；
h）气相循环时间：3.5min；
i）样品瓶加热平衡时间：10.0min；
j）样品瓶加压时间：0.10min；
k）定量环充满时间：0.10min；
l）定量环平衡时间：0.05min；
m）进样时间：1.00min。
6.2.2定性测定
样品溶液按照顶空气相色谱测定条件测定，以叔丁醇为内标，记录色谱峰的保留时间。将待测样品色谱峰的保留时间与乙醇标准对照品的保留时间比较，相对误差在±2%内，空白对照样品内标物色谱峰正常而无乙醇的色谱峰，一般可以认为待测样品中含有乙醇；必要时，选择不同的色谱条件或用气相色谱-质谱法确证。如果内标物色谱峰正常，而无乙醇的色谱峰时，可认为检验结果为阴性。乙醇对照品和内标气相色谱图，参见附录A。
6.2.3定量测定
本方法采用内标法－校准曲线法或内标法－单点校正法定量测定。
6.2.3.1内标法－校准曲线法
采用内标-校准曲线法测定（见附录B）。将乙醇对照品溶液进样，以乙醇和内标峰面积比为纵坐标，乙醇对照品工作溶液浓度为横坐标绘制标准曲线，用标准曲线对待测样品进行定量，所测样品中乙醇的浓度值应在线性范围内。
6.2.3.2内标法－单点校正法
待测血液样品乙醇浓度在标准溶液浓度的±30%内可用单点法定量。
6.3平行试验
按以上步骤对同一待测样品进行平行试验。
单柱单检测器两份样品测定结果按两份样品的平均值计算，双样相对相差不得超过10％（有凝血块的血样不超过15％）。双样相对相差按式（1）计算：
式中：
C1、C2——两份样品平行定量测定的结果；
`C——两份样品平行定量测定结果的平均值(C1+C2)/2。
双柱双检测器两份样品测定结果的相对标准偏差RSD（%）若不超过5％时（有凝血块的血样不超过10%），结果按两份样品结果的平均值计算。
7结果计算
血液中乙醇浓度测定采用内标法－校准曲线法定量或按式(2)计算：
式中：
C——血液样品中乙醇浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL)；
A——血液样品中乙醇的峰面积；
A′——标准溶液中乙醇的峰面积；
Ai′——标准溶液中内标物的峰面积；
Ai——血液样品中内标物的峰面积；
c——标准溶液中乙醇浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL)。
·附录A
（资料性附录）
乙醇对照品和内标气相色谱图
A.1按色谱柱（1）条件得乙醇对照品和内标气相色谱图，见图A.1。
·附录B
（资料性附录）
校准曲线
配制乙醇浓度为0.10、0.20、0.50、0.80、1.00、2.00、3.00mg/mL的水溶液，按6.1和6.2项下分析，每一浓度点取2份，以乙醇与内标叔丁醇的峰面积比对乙醇浓度做标准曲线。
按色谱柱（1）条件测得的标准曲线方程为 X = 1.0761 C - 0.0162（r = 0.9997），按色谱柱（2）条件测得的标准曲线方程为 X = 1.0655 C - 0.0177（r = 0.9997）。式中X为乙醇与叔丁醇的峰面积比值，C为乙醇工作溶液浓度(mg/mL)。
戴卫祥 律师
戴卫祥，男，辽宁东亚律师事务所合伙人，三级律师，工学、法学学士学位。现任辽宁省律师协会政府法律顾问专业委员会委员、辽宁省省级人民监督员，大连市律师协会房地产与建设工程法律专业委员会副主任，大连市司法局法律顾问。
2001年从事法律工作，具有多年工作经验、律师执业经验及4年工程建设现场管理经验，先后担任恒大集团大连公司、辽宁公司监察室主任。执业以来，代理过建设工程鉴定、刑事鉴定、机动车交通事故鉴定、医疗损害及医疗产品质量鉴定、消防工程鉴定、环境损害鉴定等各类司法鉴定案件，积累了丰富的司法鉴定办案经验，并成功代理过多起通过司法鉴定确定无罪的刑事、司法鉴定行政确认等案件，在司法鉴定专业有深入、系统的研究和实践。
执业期间，秉承“忠实、勤勉、认真、专业”的执业理念，为多家企业及个人办理几百起成功案件，以认真细致地专业服务，赢得了当事人的一致认可和信赖。
戴卫祥律师联系方式
电话：13940919059
微信号码：dailvshi8
大连市中山区鲁迅路58号天通金融大厦1616
司法鉴定律师
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